測定多維預(yù)混合飼料中的維生素E有多種的方法。最常用的方法一般會使用將樣品進行皂化，然后用溶劑進行萃取，揮發(fā)溶劑后再進行稀釋，配制到一定的濃度，再進行HPLC的分析。 

　　我們先來討論一下皂化的作用。皂化是一種化學(xué)反應(yīng)，是酯類化合物和強堿反應(yīng)，生成醇和酸的反應(yīng)，生成的酸再和強堿反應(yīng)生成鹽和水。在飼料的分析中不是利用反應(yīng)的生成物，而是有以下的作用： 

　　對于用明膠包膜的維生素組分，可以打開明膠包膜，使內(nèi)容物溶出。 

　　對于脂溶性維生素，通過萃取可以去除一部分雜質(zhì)。 

　　可以在分析低含量脂溶性維生素樣品時，濃縮組分。 

　　從上面的論述中我們可以了解到，皂化反應(yīng)在分析維生素E組分時，可以起去除一部分雜質(zhì)，在分析低含量樣品時可以起到濃縮組分的作用。在進行皂化反應(yīng)和萃取的過程中，操作的難度較高，影響準確度的因素很多，如果操作者不熟練的話，則會得到偏低的結(jié)果，甚至測不出維生素E來。因為維生素E醋酸酯經(jīng)皂化后會變成生育酚，而酚羥基從理論上說是帶有酸性的，極易破壞。所以化驗員要進行反復(fù)的練習(xí)后，并經(jīng)過回收率的測試后，才能進行樣品的分析操作。對于多維預(yù)混合飼料中的維生素E，一般來說含量比較高，雜質(zhì)的干擾也可以忽略。因此，下面推薦一種直接萃取的方法來進行分析，操作簡單準確度很高; 

　　多維預(yù)混料中維生素E醋酸酯的測定 

　　試驗方法 

　　除特別注明外，試驗中所用試劑均為分析純，水為相應(yīng)純度的水，溶液為水溶液，試驗儀器為一般實驗室設(shè)備。 

　　試劑和溶液： 

　　甲醇（HPLC級） 

　　甲醇 

　　維生素E醋酸酯對照品 

　　標準溶液的制備： 

　　稱取維生素E醋酸酯對照品約100mg（準確到0.0001g）,置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后再精密吸取10.00mL置于另一100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容。濃度約為100μg/mL。 

　　維生素預(yù)混料樣品溶液的制備： 

　　稱取預(yù)混料約1g(精確到0.0001g)于100mL的容量瓶中，加入甲醇約70mL，置于50℃超聲波水浴中處理20min，冷至室溫后用甲醇定容，充分搖勻。再取部分溶液用甲醇進行稀釋，最終濃度約在50~120μg/mL，取部分溶液離心，上層清液通過0.45μm濾膜過濾后，用于HPLC測定。 

　　進樣： 

　　將標準溶液和試樣溶液各50μL依次注入儀器進行分析。（進樣量可以根據(jù)不同的儀器自行調(diào)整） 

　　色譜條件 

　　色譜柱：Lichrospher100RP-8,C8,5μm,250mm×4.0mm 

　　流動相：甲醇（HPLC級） 

　　流速：1.0mL/min 

　　進樣量：50μL 

　　檢測波長：285nm 

　　運行時間：約7min 

　　分析結(jié)果的計算： 

　　樣品中所含維生素E(mg/g)的效價可依照下式計算： 

　　Cst×Wst×As×ns 

　　維生素E=__________________________ 

　　W×Ast×nst 

　　式中：Cst—維生素E對照品的含量，%； 

　　Wst—維生素E對照品的質(zhì)量，mg； 

　　Ast—維生素E對照品的峰面積； 

　　As—樣品溶液的維生素E峰面積； 

　　nst—維生素E標準溶液的稀釋倍數(shù)； 

　　ns—樣品溶液的稀釋倍數(shù)； 

　　W—樣品的質(zhì)量，g。 

　　注：如果樣品中雜質(zhì)太多，在高效液相色譜中與維生素E分離不完全，則應(yīng)采用皂化的分析方法進行分析。 

　　使用直接萃取的本方法進行多維預(yù)混料中維生素E醋酸酯的分析，其回收率可以高達95％以上，準確度非常的高。